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UV1901PC紫外可見分光光度計(jì)法測(cè)定水楊酸的含量 

一.UV1901PC紫外可見分光光度計(jì)簡(jiǎn)介

分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。

二.UV1901PC紫外可見分光光度計(jì)法原理

分光光度法是在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析。

分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源，光線透過測(cè)試的樣品后，部分光線被吸收，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

紫外吸收光譜的定性分析為化合物的定性分析提供了信息依據(jù)。由于分子結(jié)構(gòu)不同但只要具有相同的生色團(tuán)，它們的zui大吸收波長(zhǎng)值就相同。因此，通過對(duì)末知化合物的掃描光譜、zui大吸收波長(zhǎng)值與已知化合物的標(biāo)準(zhǔn)光譜圖在相同溶劑和測(cè)量條件下進(jìn)行比較，就可獲得基礎(chǔ)鑒定。 

1-苯甲酸；2-水楊酸 

水楊酸在波長(zhǎng)300 nm處有吸收峰，而苯甲酸此處無吸收，在波長(zhǎng)230 nm兩組吸收峰重疊，為了避開其干擾，選用300 nm波長(zhǎng)作為測(cè)定水楊酸的工作波長(zhǎng)。由于乙醇在250～350nm無吸收干擾，因此可用60%乙醇為參比溶液。

三.儀器與試劑 

1．儀器 

UV1901PC紫外可見分光光度計(jì)；容量瓶100mL 1個(gè)、50mL 5個(gè)；刻度吸量管1mL、2mL、5mL各1支 。 2．試劑 

水楊酸對(duì)照品（分析純）；60%乙醇溶液（自制）。

 四、實(shí)驗(yàn)步驟 

1、標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：準(zhǔn)確稱取0.0500 g水楊酸置于100 mL燒杯中，用60%乙醇溶解后，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，以60%乙醇稀釋至刻度，搖勻。此溶液濃度為0.5mg·mL-1。 

2、將五個(gè)50mL容量瓶按1-5依次編號(hào)。分別移取水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL于相應(yīng)編號(hào)容量瓶中，各加入60%乙醇溶液，稀釋至刻度，搖勻。 

3、用1 cm石英吸收池、，以60%乙醇作為參比溶液，在200～350 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定一份水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的紫外吸收光譜，確定zui大吸收波長(zhǎng)。 

4、在選定波長(zhǎng)下，以60%乙醇為參比溶液，由低濃度到高濃度測(cè)定水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液系列及未知液的吸光度。以水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)水楊酸試液的吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算水楊酸試樣中水楊酸的含量。 

五、數(shù)據(jù)處理 

1. 根據(jù)某一濃度下的全波長(zhǎng)掃描圖，確定*吸收波長(zhǎng)。

 2、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算工作曲線方程及R2值。

 3、計(jì)算未知樣中水楊酸的濃度。