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UV1901PC紫外分光光度計測多巴胺含量

UV1901PC紫外分光光度計測多巴胺含量的原理是根據(jù)多巴胺與亞硝酸鈉在pH5.90時的反應產物在300nm處有zui大吸收,多巴胺質量濃度在0~10LgPmL范圍內與吸光度之間遵從朗伯比爾定律,表觀摩爾吸光系數(shù)為1.85@104L#mol-1#cm-1,檢測限為0.1LgPmL。

多巴胺是一種神經傳遞物質,在體內是合成去甲腎上腺素的直接前體,具有重要的生理作用。作為藥物,能增強心肌收縮力,對內臟血管有擴張作用,增加血流量,有利于改善休克時重要臟器的血

液供應,適用于感染性、心源性、失血性休克以及心臟停搏時起搏升壓。

因多巴胺與四氯苯醌之間的荷移反應,用UV1901PC紫外分光光度計測定針劑中的多巴胺從甜馬鈴薯中提取多酚氧化酶,將多巴胺氧化為相應多巴胺色素,建立了測定藥劑中多巴胺的分光光度法,但操作繁雜。本研究依據(jù)多巴胺與亞硝酸鈉在水介質中即可生成有較高吸光度產物的反應,建立了測定多巴胺注射液中多巴胺含量的分光光度法。該法操作簡便,靈敏迅速,有寬的線性范圍,與英國藥典規(guī)定的液相色譜法對照,結果吻合。

1實驗部分

1.1儀器

UV1901PC紫外分光光度計(上海奧析);

UV1901PC紫外分光光度計采用濱松無臭氧環(huán)保型氘燈，普通長壽命氘燈會有臭氧產生，長期吸入對身體有害，無臭氧長壽命氘燈就可以有效避免。UV1901PC紫外分光光度計還采用德國歐士朗鎢燈，美國派來芝檢測器，雙光束光學系統(tǒng)，加厚光學底板，更能保證儀器的穩(wěn)定性。操作界面和操作系統(tǒng)都是簡便快捷版的，減少了檢測時間的同時，增加準確性.吸光度可以到小數(shù)點后四位?？蛇x配多種附件，自動四聯(lián)池，七聯(lián)池，恒溫裝置，透過率固體架，反射率固體架等。

UV1901PC紫外分光光度計的顯示方式：6英寸 320×240 點陣帶背光數(shù)字 LCD

光源燈：預調日本濱松無臭氧環(huán)保型氘燈 歐司朗長壽命鹵鎢燈

光學系統(tǒng)：精密雙光束光學系統(tǒng)

接口：RS232C串行通訊口用于接配軟件，并行打印口用于接配打印機

光譜掃描功能：主機及軟件支持

電源電壓：100V～240V   50/60±1Hz

儀器尺寸：650×450×220（mm）

凈重：25Kg

特點

UV1901PC紫外分光光度計的光學系統(tǒng)設計和電路控制系統(tǒng)設計十分嚴謹,元器件的選用控制嚴格,具有高標準的準確度、重復性、低噪聲和低雜散光指標，線性范圍和穩(wěn)定性指標也十分出色。有1nm和2nm帶寬兩種配置適合不同用戶選擇，大屏幕LCD顯示，具高測量精度和穩(wěn)定性，是一款高品質的儀器。

UV1901PC紫外分光光度計使用日本濱松無臭氧環(huán)保型氘燈，使用壽命達到2000小時，光輸出可保持穩(wěn)定直至其使用壽命，替換極為方便。

UV1901PC紫外分光光度計提供2種操作模式：主機測量模式或軟件控制測量模式。

內建的SCM技術和定性定量分析軟件能實現(xiàn)數(shù)據(jù)采集與處理、光譜測量、動力學測量、定量分析、DNA測定和光譜掃描等擴展功能。菜單下拉式分析軟件易于操作。

UV1901PC紫外分光光度計具有開放式的樣品室，可選配反射樣品架、固體樣品架、恒溫水浴和自動進樣器等適合于不同的應用。

單機掃描曲線可以存儲9條，工作曲線可以存儲9條。聯(lián)機模式儲存數(shù)量不限。

pHS-3C型酸度計(上海雷磁儀器廠)。

多巴胺標準儲備液100LgPmL(化學對照品,中國藥品生物制品檢定所),準確稱取0.01g多巴胺,用二次水稀釋至100mL,4e儲存,用時稀釋為40LgPmL的工作液。NaNO2(10gPL)水溶液,避光保存。HAc-NaAc緩沖溶液(pH5.90),0.1molPLHAc和0.1molPLNaAc以1B16的體積比混合。

所用試劑均為分析純,實驗用水均為二次水。

1.2實驗方法

準確移取40LgPmL的多巴胺標準液2mL于10mL比色管中,加NaNO2溶液2mL,HAc-NaAc緩沖溶液5mL,搖勻,置于沸水浴中加熱3.5min。取出用流水冷卻至室溫,用水稀釋至刻度,搖勻。以試劑空白為參比,用1cm比色皿在300nm處測量其吸光度。

2結果與討論

2.1吸收光譜

按實驗方法配制溶液后,在分光光度計上,以試劑空白為參比掃描溶液的吸光度,得到吸收光譜如圖1所示。由圖可見,反應產物Kmax=300nm。NaNO2的Kmax為356nm;多巴胺的Kmax為279nm。

2.2反應影響因素研究

2.1加熱時間影響

多巴胺在加熱不同時間后的吸光度,結果表明加熱時間為3~4min時,吸光度zui大。所以選擇加熱時間為3.5min。

2.2pH的影響按實驗方法測量不同pH值時溶液的吸光度,

結果如圖2所示。

圖1圖2

由圖可見,pH5.9時,溶液的吸光度zui大。所以選擇pH5.9的HAc-NaAc緩沖溶液,但要嚴格控制pH值,每次加入緩沖溶液510mL。

2.3試劑用量影響按照實驗方法,保持多巴胺濃度不變,逐步增大NaNO2(10gPL)的加入量,測定溶液的吸光度。結果發(fā)現(xiàn),隨著NaNO2加入量的增大,溶液的吸光度逐漸增大;當加入量\1.5mL時,溶液的吸光度基本不變,所以確定*加入量為2mL。

2.4試劑加入順序影響按照實驗方法,依照不同順序加入試劑,測量溶液的吸光度,結果表明試劑加入的*順序為先加NaNO2后加HAc-NaAc緩沖溶液。

2.2.5產物的穩(wěn)定性按照實驗方法,測定放置不同時間后溶液的吸光度,結果表明,放置時間在90min之內溶液的吸光度基本不變,產物比較穩(wěn)定。

2.3選擇性

按照實驗方法,研究4LgPmL多巴胺水溶液中各種外來常見離子對體系的影響,控制測定誤差在5%以內,下列離子的允許存在量(LgPmL)為:K+(30)、Mg2+(25)、Cu2+(25)、Pb2+(10)、Cl-(60)、Ca2+(10)、Zn2+(100)、HPO42-(10)、PO43-(6)、SO42-(300)

2.4方法特性

2.4.1標準曲線按實驗方法配制多巴胺的標準系列,分別測定其吸光度,實驗表明多巴胺的濃度在0~10LgPmL范圍內與吸光度呈線性關系,線性回歸方程為:A=010436c+0100591,r=0.9978。

2.4.2檢測限平行測定試劑空白的吸光度,按照空白加3倍標準偏差所對應的濃度,檢測限為0.1LgPmL。

2.4.3精密度按照實驗方法將同一樣品測定10次,多巴胺的平均質量濃度為2.0LgPmL,相對標準偏差為5.3%。

2.5樣品分析

2.5.1多巴胺注射液樣品分析多巴胺的注射液

用二次水稀釋至不同濃度,作為樣品溶液進行檢測。結果見表1。從表可看出,用分光光度法測定

所得結果與用HPLC法相符,在置信度等于95%,用Cochran檢驗兩種方法間不存在顯著性差異。

表1樣品的測定

5.2回收率按實驗方法,測定多巴胺注射液的回收率,結果如表2所示。

表2

結論

本文建立了用分光光度法測定多巴胺注射液中多巴胺的方法,該法操作簡單,檢出限低,線性范圍較寬。