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分光光度計是參考測量實驗室的關(guān)鍵設(shè)備之一，評價分光光度計的性能是否符合要求對酶學(xué)參考測量工作的 有效開展非常重要。方法 分光光度計基本性能指標(biāo)需經(jīng)北京市海淀區(qū)計量檢測所檢定。本實驗室參考美國臨床實驗室 標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會( Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI) EP 系列文件，結(jié)合參考實驗室特點，利用以 AgilentCary100 分光 光度計為主要設(shè)備的參考測量檢測系統(tǒng)，按照臨床化學(xué) 和實驗室醫(yī)學(xué)聯(lián)合會 ( International Federation of Clinical Chemistry and laboratory medicine，IFCC) 公布的一級參考測量程序( 37℃ ) 對丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶( ALT) 、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 ( AST) 、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶( GGT) 進(jìn)行測定，評價系統(tǒng)的基本性能參數(shù)、精密度、正確度、分析測量范圍。結(jié)果 AgilentCary100 紫外可見分光光度計的基本性能指標(biāo)經(jīng)海淀區(qū)計量檢測所檢定，結(jié)果示透射比示值誤差、透射比重復(fù)性、波長示值誤差、波 長重復(fù)性、噪聲、雜散光均在允許誤差范圍內(nèi)。ALT、AST、GGT 三種酶測定的總變異系數(shù)( CV) 均小于 1% 。測定有證參考物 質(zhì)( EＲM) 和參考實驗室外部質(zhì)量評價計劃( ＲELA) 樣本檢測結(jié)果的均值和相對偏倚均在允許的范圍內(nèi)。ALT、AST、GGT 三 種酶的分析測量范圍上限分別為 240U /L，330U /L，310U /L，均接近或高于 IFCC 公布的參考方法的上限。結(jié)論AgilentCary100 分光光度計的性能條件符合酶學(xué)參考測量的要求，測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

作為參考測量系統(tǒng)的重要組成部分，分光 光 度 計的性能直接 影 響 檢 測 結(jié) 果 的 準(zhǔn) 確 性 和 可 靠 性，同 時，參考測量領(lǐng)域?qū)x器設(shè)備的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性提出 了更高的要求，因此，需要對分光光度計的性能進(jìn)行 系統(tǒng)評價，保證參考測量結(jié)果的科學(xué)、準(zhǔn)確。丙氨酸 氨基轉(zhuǎn)移酶( ALT) 、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶( AST) 、γ- 谷氨酰轉(zhuǎn) 肽 酶 ( GGT) ［1］ 是酶學(xué)參考測量的常規(guī)項 目，也是肝功能檢測的基 本項目。 作 為 通 過 ISO17025 認(rèn)可的參考測量 實 驗 室，本 實 驗 室 已 建 立 包括天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶在內(nèi)的參考方法［2］，且 多年來應(yīng)用 Thermo Evolution 300 分光光度計為關(guān)鍵 測量設(shè)備之一參加 ＲELA 及衛(wèi)生部室間質(zhì)評成績均 合格［3］，證明本實驗室整個參考測量系統(tǒng)符合參考 測量工作的 要 求。為更好的開展參考測量工作，本 實驗 室 引 進(jìn) 了 Agilent Cary100 紫 外 可 見 分 光 光 度 計，作為酶學(xué)參考測量的關(guān)鍵設(shè)備之一，在啟用新的 分光光度計前 需 要 經(jīng) 過 性 能 評 價 試 驗，證 明 此 分 光 光度計性能指標(biāo)符合參考測量要求。 材料和方法 1 材料 1． 1 儀器 美國 AgilentCary100 紫外可見分光 光 度 計; 美 國 Fluke 1521 點 式 溫 度 計 ( 精 度 為 0． 001℃ ) ; 德國 Eppendorf reference 型 移 液 器; 德 國 Sartorius 電子天平( 精度為 0． 01mg、0． 1mg 各 1 臺) ; 美國 Hamilton Microlab500 稀釋配液儀; 瑞士梅特勒- 托利 多 SevenMulti 型; 美 國 Thermo Haake B12 型 水 浴鍋。 1． 2 試劑 三羥 甲 基 氨 基 甲 烷、L-丙 氨 酸、α- 酮戊二 酸、還 原 型 β-煙 酰 胺 腺 嘌 呤 二 核 苷 酸 二 鈉 鹽、吡哆醛-5 磷酸、氯 化 鈉、疊 氮 鈉、丙 酮 酸、L-天 門 冬氨酸、氫氧化鈉、草酰乙酸、N-甘氨酰甘氨酸，L-γ- 谷氨 酰-3-羧 基-4-硝 基 苯 胺、單 氨 酸 鹽、一 水 化 合 物、乳酸脫氫 酶、牛 血 清 白 蛋 白 均 購 自 Sigma 公 司; 蘋果酸脫氫酶來源于 Ｒoche 公司。實驗用水為去離 子水，電導(dǎo)率 ＞ 18 兆歐。 1． 3 樣 本 精 密 度 試 驗 樣 本 來 自 于 Ｒoche 公 司生產(chǎn)的多項生化校準(zhǔn)品( c． f． a． s，批號: 171651) ， 以及往年的 ＲELA 樣本。正確度試驗樣本來自于歐 共體參考物質(zhì)與測量研究所制備的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) ( EＲM-AD454k /AD457 /AD452) ，以及 2016 年 ＲELA 樣本。分析測量范圍試驗樣本采用人新鮮血清，高 值樣本采用添加法制備。 2 方法 1． 3 基本性能指標(biāo)評價 AgilentCary100 紫外 可見分光光度計基本性能由北京市海淀區(qū)計量檢測 所按照 JJG178-2007《紫外、可見、近紅外分光光度計 檢定規(guī)程》對 波 長、透 射 比、噪 聲、雜散光等進(jìn)行檢 定。在 340nm 處，帶 寬 2nm，每 秒 測 定 一 次 吸 光 度， 共連 續(xù) 監(jiān) 測 2 小 時，計 算 吸 光 度 隨 時 間 的 變 化 率。 參考美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會( CLSI) EP15-A2 文 件［4］，選擇 c． f． a． s 樣本，以及往年留存的室間質(zhì)評 樣本，按照要求進(jìn)行復(fù)溶，對 ALT、AST、GGT 三個項 目按照 IFCC 公布的參考測量程序連續(xù)檢測 5 天，每 天 1 批，每個樣本重復(fù) 4 次。對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。 3 正確度驗證實驗 參考 CLSI 頒 布 的 EP15-A2 文 件，分 別 對 EＲM 和 ＲELA 2016 樣本進(jìn)行檢測: ( 1 ) 檢 測 EＲM-AD454k /AD457 /AD452，根 據(jù) EＲM 體積特點，共檢測 3 ～ 8 次，計算均值，判斷其是 否在標(biāo)示 值 不 確 定 度 范 圍 內(nèi); ( 2 ) 測 定 ＲELA 2016 A、B 樣本，每批 2 次重復(fù)，測定 5 天，計算均值，并與 ＲELA 公布的所有實驗室均值比較，觀察其是否在給 定的置信區(qū)間內(nèi)。 4 分析測量范圍評價 參考 CLSI EP6-A［5］ 文 件，選 擇 覆 蓋 IFCC 文 件 提供線性范 圍 的 20% ～ 30% 的 高( H) 、低( L) 濃 度 水平混合血清，低濃度樣本為人新鮮血清，高濃度樣 本為人新鮮血 清 添 加 室 間 質(zhì) 評 樣 本 制 得，按 比 例 配 制成 6 個系列濃度樣本，每個樣本重復(fù)檢測 4 次，將 所得數(shù)據(jù)進(jìn)行多項式回歸統(tǒng)計。 5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用 SPSS 17． 0 軟件系統(tǒng)對實驗結(jié)果進(jìn)行均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差( x ± s) 、變 異 系 數(shù) ( CV) 以及回歸等相關(guān) 分析。 結(jié) 果 1 基本性能指標(biāo)結(jié)果 基本性能指標(biāo)結(jié)果見表 1。 表 1 Agilent Cary100 紫外可見分光光度計檢定結(jié)果 項目 檢測結(jié)果 允許誤差 波長示值誤差( nm) 0． 6 ± 6． 0 波長重復(fù)性( nm) 0． 0 ≤3． 0 透射比示值誤差( % ) － 1． 5 ± 2． 0 透射比重復(fù)性( % ) 0． 1 ≤1． 0 雜散光( % ) 0． 1 ≤2． 0 噪聲 0% 線( % ) 0． 0 ≤0． 5 100% 線( % ) 0． 0 ≤1． 0 吸光度穩(wěn)定性( abs/ h) － 0． 000124 ± 0． 0003 2 精密度評價結(jié)果 ALT、AST、GGT 總不精密度指標(biāo)均小于 1% ，見 表 2。

3 正確度評價結(jié)果 按 照 IFCC 公 布 的 參 考 測 量 程 序 檢 測 EＲMAD454k /AD457 /AD452，結(jié) 果 均 在 有 證 標(biāo) 準(zhǔn) 物 質(zhì) 的 標(biāo)示值不確 定 度 范 圍 內(nèi)。測 定 ＲELA 2016 A、B 樣 本，其均值均在給定的置信區(qū)間內(nèi)。

4 分析測量范圍評價結(jié)果 對 ALT、AST、GGT 檢測結(jié)果進(jìn)行線性模型回歸 分析，其回歸系數(shù) Ｒ2 ＞ 0． 999，其在建立的分析測量 范圍內(nèi)成線性，見圖 1、圖 2、圖 3。ALT、AST、GGT 分 析測量范圍上限分別為 240U /L，330U /L，310U /L， 均接近或高于 IFCC 公布的參考測量程序的檢測上 限，線性回歸模型及回歸方程見。

參考測量程序和參考實驗室處于溯源鏈的上 游［6-8］，參考測量工作對試劑、儀器、人員等各方面的 要求都較 高，我國酶學(xué)參考測量網(wǎng)絡(luò)已經(jīng)建立［9］。 作為酶學(xué)參考 測 量 工 作 的 關(guān) 鍵 設(shè) 備 之 一，分 光 光 度 計的性 能 至 關(guān) 重 要。本實驗通過檢測 ALT、AST、 GGT 這三項已 通 過 CNAS 認(rèn)可的參考測量項目，同 時從多角度全面評價 Agilent Cary100 分光光度計的 性能，評價 結(jié) 果 準(zhǔn) 確、可 靠。在 精 密 度 評 價 中，GGT 項目檢測 c． f． a． s 總 變 異 系 數(shù) 小 于 檢 測 往 年 ＲELA 樣本的變異系數(shù)，而前者的濃度較低，考慮可能的原 因為此實驗中 所 用 的 ＲELA 樣 本 存 放 過 久，樣 本 本 身的不穩(wěn)定性較大，導(dǎo)致其測定結(jié)果 CV 較大。在精 密度評價結(jié)果中，雖然此實驗各項目檢測總 CV 均小 于 1% ，而本實驗室質(zhì)量目標(biāo)為總 CV 小于 2% ，，這 是考慮到淀粉 酶、葡萄糖等變異較大的項目綜合自 身檢測能力而 制 定 的，這也與國內(nèi)其他實驗室的實 驗室質(zhì)量控制目標(biāo)一致［10］。與 Thermo Evolution 300 分光光度 計 相 比［11］，Agilent Cary100 分 光 光 度 計 對 溫度控制更加穩(wěn)定，受外界環(huán)境溫度影響小，批間重 復(fù)性好，這主要是由于加熱模塊的工作原理不同， Agilent Cary100 分光光度計采用水循環(huán)加熱，Thermo Evolution 300 分光光度計采用半導(dǎo)體模塊加熱，前者 溫度控制更穩(wěn)定，但也存在更改溫度設(shè)置后，溫度變 化響應(yīng)速度慢 的 缺 點，需要試驗人員對試驗環(huán)節(jié)的 準(zhǔn)確控制，才能保證參考測量程序的有效執(zhí)行。同 時，Agilent Cary100 分光光度計可同時進(jìn)行多杯檢 測，且重復(fù)性較好，利于提高試驗效率。 Agilent Cary100 紫外可 見 分 光 光 度 計 的 性 能 條 件符合酶學(xué)參考測量的要求，測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。