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紫外可見分光光度計檢定過程中的注意事項

紫外可見分光光度計是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對物質(zhì)進行定性和定量分析的儀器。 在生物制藥、精細化工、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用，并被納入《中華人民共和國強制檢定的工作計量器具明細目錄》， 需要根據(jù)檢定規(guī)程定期檢定。 雖然目前檢定機構(gòu)在檢定紫外可見分光光度計時均嚴格執(zhí)行JJG178-2007《紫外、可見、近紅外分光光度計》檢定規(guī)程，但還是經(jīng)常會出現(xiàn)對同一臺儀器在不同的檢定機構(gòu)給出的檢定結(jié)果不同，

判定不合格的儀器返廠修理時并未發(fā)現(xiàn)問題的現(xiàn)象。

實際上很多時候并不是儀器出了問題，只要檢定人員在檢定過程中注意一些細節(jié)問題，就可以避免誤判情況的發(fā)生。

一、波長示值誤差項目檢定中需注意的問題

波長示值誤差是一項重要指標，JJG178-2007中對該項指標的檢測，有多種標準物質(zhì)供選擇。 選擇哪一種標準物質(zhì)，要根據(jù)儀器的情況判定。 一般zui常用的波長標準物質(zhì)是氧化鈥玻璃濾光片、鐠釹玻璃濾光片。 但由于氧化鈥玻璃等濾光片需要通過高等級紫外可見分光光度計對參考波長定值后才可用于對等級相對較低的儀器進行檢測，所以使用時需充分考慮定值時使用的紫外可見分光光度計的性能， 尤其需要考慮儀器的光譜帶寬， 定值用儀器的光譜帶寬多設(shè)定為2nm。 但大多數(shù)儀器的光譜帶寬是固定的， 而且較大， 尤其是低檔儀器， 如 752 型紫外可見分光光度計光譜帶寬為4nm。 表1、表2分別為同一臺紫外可見分光光度計在其他條件不變的情況下，光譜帶寬分別設(shè)定為0.5nm、2.0nm、5.0nm時使用氧化鈥玻璃濾光片和鐠釹玻璃濾光片掃描得到的峰值數(shù)據(jù)， 可見當儀器的光譜帶寬發(fā)生變化時，使用氧化鈥玻璃濾光片或鐠釹玻璃濾光片檢測得到的波長誤差存在較大差異，對于光譜帶寬較大的儀器甚至部分波峰檢測不到。 而且對于具備自動掃描功能的儀器，掃描速度同樣對檢測結(jié)果有不可忽視的影響，如表3所示。

如果定值機構(gòu)能夠分別給出濾光片在不同光譜帶寬下所對應(yīng)的峰值，詳細描述定值所用儀器的各項參數(shù)。 檢定員在檢定過程中根據(jù)被檢儀器的實際光譜帶寬選擇合理的參考值，并盡量將儀器掃描速度等參數(shù)設(shè)定為濾光片定值時所使用的紫外可見分光光度計的參數(shù)，將有效避免定值儀器與被檢儀器因參數(shù)設(shè)定的差異引入的測量誤差。 雖然鐠釹玻璃濾光片的波長范圍可以達到（500～900）nm，但并不適合將鐠釹玻璃濾光片作為波長示值誤差判定的*標準，原因是鐠釹玻璃濾光片的峰值并不尖銳，比較圓滑。 僅可作為對某一空白波段的補償。 例如使用氧化鈥玻璃濾光片作為主標準器檢測（200～700）nm范圍的波長值，再用鐠釹玻璃濾光片補充（700～900）nm波段的波長值。對于光譜帶寬不可調(diào)且較大的儀器如果使用濾光片檢定不合格時切不可急于判定，而應(yīng)該改用汞燈等自然標準重新對儀器波長誤差進行檢定，以此為依據(jù)作出判斷。

二、透射比示值誤差檢定中需注意的問題

透射比示值誤差反映了儀器測光的準確度， 使用的標準器通常為： 標準溶液、 金屬鍍膜濾光片和中性濾光片。 實際檢定中多使用金屬鍍膜濾光片和中性濾光片，其中金屬鍍膜濾光片可以滿足紫外光段和可見光段的檢定，中性濾光片僅可滿足可見光段的檢定。 檢定中經(jīng)常會發(fā)現(xiàn)部分單光束低端儀器（如752型、721型分光光度計）透射比示值誤差超差的現(xiàn)象， 實際上這種結(jié)果可能是由以下原因造成的：

1.分光光度 入射光的光斑 大大部分單光束紫外可見分光光度計入射光的光斑較大，用濾光片檢定時，濾光片的支架的邊緣遮擋

了部分光，造成檢定結(jié)果超差。 解決方法：以空氣為參比，對分光光度計透射比調(diào)節(jié)100%時，在比色皿中插入未安裝濾光片的空白支架。

2. 定用 光片 光的反射引起的 差這種現(xiàn)象主要發(fā)生在使用金屬鍍膜濾光片檢定儀器透射比誤差時。 用于檢定儀器透射比誤差的理想濾光片應(yīng)能夠均勻地降低入射光的強度，不存在對入射光的反射。 但目前所使用的金屬鍍膜濾光片的表面均會對入射光產(chǎn)生一定的反射，造成測量誤差，這個現(xiàn)象在對使用透鏡式光路的低端紫外可見分光光度計檢定中尤其明顯。 而且金屬鍍膜濾光片存在計量性能不穩(wěn)定的問題， 由于該濾光片表面是一層鍍膜，如果鍍膜表面受到污染，在清理時很容易對鍍膜造成破壞，改變?yōu)V光片原有數(shù)值。 解決方法：使用金屬鍍膜濾光片對紫外光段的透射比誤差進行檢定，使用中性濾光片對可見光段的透射比誤差進行檢定，當發(fā)現(xiàn)僅紫外光段透射比誤差不合格時， 使用標準溶液進行復測，以標準溶液的檢定結(jié)果作為紫外光段透射比誤差的zui終檢定結(jié)果。

3. 定用 光片入射面  所造成的 差

由于濾光片制作工藝水平的限制， 濾光片的厚度不可能*均勻，更不能保證濾光片放入比色皿架后， 入射光能夠*垂直照射在濾光片上， 這就造成同一個濾光片， 選擇的入射面不同時， 測得的透射比示值也是不同的，造成測量誤差，甚至誤判。解決方法： 對濾光片定值時， 如果定值機構(gòu)在定值時能夠考慮這個問題，根據(jù)定值時的實際情況在濾光片上標明入射光的方向或入射面，檢定儀器時根據(jù)定值機構(gòu)的標注選擇濾光片入射面， 放置濾光片，就可以有效減小因濾光片入射面選擇不同造成的測量誤差。

三、結(jié)束語

紫外可見分光光度計的波長示值誤差和透射比示值誤差是檢定過程中zui重要的兩個檢定項目，而且這兩個檢定項目在檢定過程中很容易因細節(jié)問題注意不夠造成誤判， 本文主要介紹了筆者針對以上兩個項目在檢定過程中的一些體會和經(jīng)驗， 希望能夠?qū)z定員的日常檢定有所幫助。